Содержание
- Разновидности ПЦР
- Кому необходимо пройти исследование
- Правила подготовки к ПЦР-диагностике
- Расшифровка ПЦР-исследования
- Таблица возможных результатов
- Преимущества ПЦР-анализа перед другими способами исследования
- Минусы ПЦР-исследования
- Стоимость ПЦР-анализа
ПЦР (полимеразная цепная реакция) является самым эффективным методом диагностики ДНК и РНК вируса гепатита С в условиях лаборатории. Впервые он был применен американским врачом Кэри Муллисом около 50 лет назад.
ПЦР-анализ очень чувствителен: для обнаружения возбудителя заболевания достаточно всего одной молекулы, которую обычно выявляют в биологической жидкости или кожных покровах.
Разновидности ПЦР
ПЦР-анализа крови при вирусном гепатите С всего три:
- Качественный. Его назначают больным, у которых с помощью ИФА-анализа были обнаружены антитела к возбудителю ХВГС. Результатом качественного ПЦР становится определение наличия или отсутствия РНК вируса. Для выявления минимального количества вируса требуются тест-системы с чувствительностью более 50 МЕ/мл. При незначительной концентрации вируса в крови инфицированного (меньшей, чем необходимо для определения диагностикумом) есть вероятность получения ложноотрицательного результата исследования. Для исключения подобной ошибки в лабораториях, проводящих ПЦР-диагностику, должны быть высокочувствительные тест-системы. Информация о чувствительности тестов сотрудниками лабораторий предоставляется по первому требованию.
- Количественный. Необходим для определения степени виремии, то есть, уровня вирусной нагрузки. Результат анализа отображают с помощью цифр: например, 2×10*6 МЕ/мл (2 миллиона международных единиц в 1 мл крови). В некоторых лабораториях используют другой параметр - число копий/мл. Эти показатели с легкостью конвертируются: одна международная единица равна четырем копиям РНК. Например, 2×10*6 МЕ/мл означает, что в крови пациента обнаружено 8×10*6 копий вирусной РНК в 1 мл (8 млн. копий в 1 мл крови).
- Генотипирование вируса. Позволяет определить один из шести генотипов вируса. От генотипа зависит общая клиническая картина, скорость возникновения осложнений и прогноз для жизни больного. Определить генотип вируса очень важно уже при постановке диагноза: от этого будет зависеть схема лечения, которую врач подберет для больного, и продолжительность терапевтического курса.
Рекомендуемые товары
Кому необходимо пройти исследование
ПЦР назначают при:
- выявлении симптомов воспаления печени;
- скрининговых исследованиях, проводимых с профилактической целью;
- обследовании людей, контактировавших с инфицированным;
- диагностировании гепатитов смешанного происхождения;
- определении степени активности размножения возбудителя (в случае хронической формы);
- циррозе;
- оценке эффективности назначенной терапии.
Правила подготовки к ПЦР-диагностике
Для анализа берется венозная кровь: сдавать ее нужно утром натощак. Пациент, готовясь к сдаче ПЦР-анализа, должен исключить:
- прием пищи - за десять часов до процедуры;
- употребление спиртных напитков - за сутки до манипуляции;
- курение - за четыре часа до анализа;
- прием лекарственных препаратов - за два дня до взятия крови;
- физические нагрузки и эмоциональные потрясения.
Расшифровка ПЦР-исследования
Расшифровывать ПЦР и иммуноферментный анализ должен врач-гепатолог или инфекционист. Специалист проанализирует результаты ПЦР в комплексе с результатами биохимического анализа крови, биопсии и ультразвукового исследования и, основываясь на полученных данных, подберет правильное лечение.
Таблица возможных результатов
Расшифровка качественного анализа
|
Обнаружено
|
Анализируемый биологический материал показал наличие генетического материала возбудителя. Пациент инфицирован.
|
|
Не обнаружено
|
Пациент не инфицирован или концентрация РНК возбудителя меньше порога чувствительности.
|
Расшифровка количественного анализа
|
Не обнаружено
|
Является нормой для здоровых людей. Означает, что исследуемый материал не содержит РНК гепатита С или его количество меньше границ чувствительности.
|
|
До 1,8*10^2 МЕ/мл
|
Концентрация РНК меньше, чем диапазон количественного определения. Трактовка подобных результатов должна быть очень осторожной: их рассматривают в совокупности с данными других исследований. Чаще всего пациенту назначается проведение повторного анализа.
|
|
До 8*10^5 МЕ/мл
|
Данная концентрация означает низкий уровень вирусной нагрузки и свидетельствует о том, что лечение проходит успешно.
|
|
Больше 8*10^5 МЕ/мл
|
Данная концентрация свидетельствует о высоком уровне вирусной нагрузки.
|
|
Больше 2,4*10^7 МЕ/мл
|
Концентрация РНК превышает верхний предел диапазона количественного определения. Пациенту требуется проведение повторного теста с разведением образца крови.
|
Расшифровка генотипирования
|
Обнаружена РНК определенного генотипа
|
У пациента выявлен возбудитель гепатита С конкретного генотипа и субтипа. Результат кодируют с помощью римских цифр и латинских букв. Существует 7 генотипов и 67 субтипов, но в РФ диагностируют только 3 первых типа.
|
|
Обнаружена РНК вируса гепатита С
|
У пациента обнаружена РНК редкого для РФ генотипа: он не относится к 1-му, 2-му или 3-му типу. Необходимо проведение дополнительных исследований.
|
|
Не обнаружено
|
Результат означает, что пациент или здоров, или концентрация РНК возбудителя в его крови очень мала.
|
Иногда случается, что при отрицательном результате ПЦР иммуноферментный анализ показывает наличие антител. Значит, пациент болел гепатитом С в острой форме и ему удалось излечиться самостоятельно, так как организм смог сопротивляться инфекции.
ПЦР является высокоточным анализом. Однако его результаты могут оказаться искаженными при:
- транспортировке крови в лабораторию в ненадлежащих условиях (например, нарушении температурного режима);
- загрязнении образцов биоматериала;
- нахождении в крови остаточных следов гепарина и прочих антикоагулянтов;
- наличии в исследуемом материале ингибиторов - веществ, способных замедлить полимеразную цепную реакцию.
Рекомендуемые товары
Преимущества ПЦР-анализа перед другими способами исследования
- Возможность проведения диагностики на ранних стадиях. Иммунофлюоресцентный анализ позволяет выявить только иммуноглобулины - вещества, вырабатываемые организмом в ответ на инфекцию. От момента заражения гепатитом С до начала иммунного ответа может пройти несколько недель или месяцев: в этом случае ИФА будет малоэффективна. С помощью ПЦР можно получить ответ уже на первой неделе после инфицирования: анализ сумеет выявить генетический материал возбудителя заболевания.
- Минимизация ошибок. При ПЦР-исследовании определяется участок генетического материала, характерный только для одного вида вирусов. Благодаря этому исключаются ложные результаты. При проведении ИФА возможно появление ошибок из-за того, что один и тот же вид антител способен выделиться против разных возбудителей.
- Высокая чувствительность. При проведении ПЦР-анализа РНК вируса можно выявить даже в минимальных количествах, что позволяет своевременно обнаруживать скрытые инфекции.
Минусы ПЦР-исследования
К сожалению, даже у такого, казалось бы, идеального анализа есть свои отрицательные стороны:
- Во время проведения исследования осуществляется репликация генетического материала всех вирусов (даже неживых): это может привести к искажению результатов. Чтобы проконтролировать эффективность, проводить повторный ПЦР-анализ следует как минимум через два месяца после предыдущего.
- Часть вирусного генома, для определения которого используют тест-системы, теоретически может находиться и в других вирусах. Следовательно, есть вероятность, что при проведении исследования будет получен положительный ответ.
- Вирусы обладают способностью быстро мутировать. Иногда это происходит с такой скоростью, что тест-система не может уловить их геном. Следствием этого становится вероятность получения ложноотрицательного результата.
Чтобы исключить эти недостатки, компании-производители лабораторных тест-систем для ПЦР-диагностики регулярно подвергают их испытаниям на перекрестные реакции и на чувствительность к определенному генотипу возбудителя гепатита С.
Стоимость ПЦР-анализа
В государственных поликлиниках сделать анализ можно бесплатно. Главное, иметь на руках направления от врача-гепатолога или инфекциониста.
Кроме того, провести подобное исследование может любая платная клиника. Цена будет зависеть от типа исследования, имеющегося оборудования и времени, затраченного на выполнение анализа.
Качественная ПЦР-диагностика в Москве и Санкт-Петербурге обойдется в 600-900 рублей, в области - 300-800 рублей.
Количественный ПЦР-анализ на выявление гепатита С стоит дороже - от 17000 до 22000 рублей, гепатита В - от 1200 до 10000 рублей.
Гарантировать достоверность анализа ПЦР на гепатит С могут только те лаборатории, которые отлично себя зарекомендовали. И ценовой политике при этом должна отводиться далеко не первостепенная роль.
